293T人胚腎細(xì)胞

英文名稱	293T	產(chǎn)品形態(tài)	上皮細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)
貨號(hào)	P-X632	產(chǎn)品分類	人
規(guī)格	1×106	包裝	株
來源	腎	用途	僅供科研研究使用

細(xì)胞特性：

細(xì)胞名稱；293T人胚腎細(xì)胞（STR鑒定正確）

種屬來源；人

組織來源；腎

生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)

背景簡(jiǎn)介；293細(xì)胞株插入SV40 T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T

STR位點(diǎn)；Amelogenin:X；CSF1PO:11,12；D13S317:12,14；D16S539:9,13；D18S51:17,18；D21S11:28,30.2；D3S1358:15,16,17；D5S818:8,9；D7S820:11；D8S1179:12,14；FGA:23；PentaD:9,10；PentaE:7,15；TH01:7,9.3；TPOX:11；VWA:16,19

生物等級(jí)；1

細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)；無

保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CRL-3216 DSMZ; ACC-635；中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫(kù)

倍時(shí)間；~24-30 hours

培養(yǎng)基；90% DMEM+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件；無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1 mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細(xì)胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。 
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。 
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。 
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。 
8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

NK細(xì)胞抑制性受體2DL1抗體	植物源性食品花生（peanut）基因檢測(cè)試劑盒
KIR2DL1	DILP5
軟骨凝集蛋白CHODL抗體	胰島素樣肽5抗體
CHODL	MCAK/KIF2C
大鼠生長(zhǎng)抑素(SS)elisa檢測(cè)試劑盒	有絲分裂著絲粒相關(guān)驅(qū)動(dòng)蛋白抗體
植物氧化應(yīng)激活性氧（ROS）魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒	原鈣粘蛋白γC3抗體
豚鼠環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)elisa檢測(cè)試劑盒	PCDHGC3
位素[γ32P]ATP激酶標(biāo)記微衛(wèi)星擴(kuò)增試劑盒	雄調(diào)節(jié)樣蛋白抗體
沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白4抗體  Anti-SIRT4/SIR 2 like protein 4	HN1L
PE-CY5標(biāo)記的兔抗馬IgG H&L	Toll樣受體3抗體  Anti-TLR3
Rabbit Anti-Horse IgG H&L / PE-Cy5	表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體  Anti-PCGF1
磷酸化細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體	節(jié)律蛋白2抗體  Anti-PER2/Period circadian protein 2
Phospho-Caveolin-1 (Tyr14)	高度相似的細(xì)胞周期蛋白激酶NEK6抗體  Anti-NEK6
鋅指蛋白201抗體  Anti-Zic1/ZNF201	293T人胚腎細(xì)胞磷酸化核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體  Anti-Phospho-RSK3 (Thr353/356)
離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白SLC7A9抗體  Anti-SLC7A9	8-iso-PGF2a ELISA Kit
大鼠8異前列腺素F2α(8-iso-PGF2a)elisa分析檢測(cè)試劑盒	人甘露糖受體(MR)elisa分析檢測(cè)試劑盒