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PCR定量試劑盒的使用特點(diǎn)

日期:2025-01-31 15:42
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摘要:
    熒光定量PCR法檢測的是來SYBR Green摻入到雙鏈DNA中的量。SYBR Green摻入到雙鏈DNA中后會發(fā)出熒光。但是只要是雙鏈,它都摻。
而探針自法是當(dāng)探針結(jié)合到目標(biāo)序列上以百后,聚合酶降解探針后,探針上自帶的熒光基團(tuán)離開淬滅基團(tuán),從而發(fā)度出熒光。從兩者的原理上來看,不難知判斷,熒光PCR法更加簡單方便,而且成本低。而探針法特異性更強(qiáng)道。

    ①熒光域值(threshold)的設(shè)定:PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設(shè)置是3~15個(gè)循環(huán)的熒光信號標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍

    ②Ct值:C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù) 二、3個(gè)階段 ①熒光背景信號階段:在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號。

PCR定量試劑盒的使用具有下列特點(diǎn):

    1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。

    2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

    3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

    4. 特異性高,引物是根據(jù)蒲公英探針法熒光定量PCR試劑盒高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

    5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。

    6. 本產(chǎn)品只能用于科研。